檢驗技師考點:抗血清的純化與保存
抗血清的純化與保存:除抗體外血清中含有多種其他蛋白成分。為了避免這些蛋白質干擾抗體(免疫球蛋白)標記反應和抗原抗體反應,抗血清可經過純化以獲得單一的機體(常為IgG)組分。
常用的純化IgG的方法為飽和硫酸胺鹽析和層析法。蛋白質在不同的鹽濃度的溶液中,其溶解度不一樣,鹽離子干擾蛋白質和水分子間氫鍵形成,因為水—鹽結合比水—蛋白質結合更穩定,蛋白質即可從溶液中沉澱出來。
蛋白質分子越大,沉澱時所需鹽離子濃度越低。
免疫球蛋白(Mr 1.5×105)比血清中主要蛋白質白蛋白(M r 6.7×104)的分子大得多,抗體在30%—50%飽和度的.硫酸鹽中析出,而白蛋白需在70%—80%飽和度才析出,因此常用33%飽和度的硫酸胺純化血清中的IgG.鹽析時為了減少抗體變性,需在4℃進行,同時用pH8.0緩衝液稀釋抗血清,以減少蛋白濃度過高而發生共沉澱。
銨鹽的溶解度不隨温度變化而明顯改變,0℃和25℃僅差3%,而鈉鹽則相差5倍,因此常在低温沉澱時用銨鹽,室温沉澱用鈉鹽。銨鹽對抗體的標記反應(如FITC和biotin標記時)有一定的干擾作用。
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