「微生物檢驗」形態學檢查對細菌鑑定的導航作用

細菌鑑定的原則之一就是用最少的試驗完成鑑定。細菌形態學檢查是最基本、簡單、快速的常規鑑定方法。細菌形態學包括細菌細胞形態學和細菌菌落形態學。細菌形態學正確描述依賴於方法、培養基、培養時間、染色試劑等，培養基和培養時間不同會影響細菌的形態。下面是yjbys小編為大家帶來的關於形態學檢查對細菌鑑定的導航作用的知識，歡迎閲讀。

　　1　菌落特徵觀察

細菌在固體培養基表面生長形成菌落。對菌落進行描述應包括菌落大小(分大、中、小，以1mm為界)、形狀、高度、邊緣、表面狀態、密度(透明度)、硬度(用接種環刮取菌落時的感覺)、菌落內部結構、顏色、光澤以及與培養基表面的黏附程度，還應包括菌落的溶血、氣味和色素產生情況等特性。觀察菌落特徵的目的是為了對細菌進行初步鑑定。有些特徵是某些細菌所特有的，具有屬或種的鑑別價值，如肺炎鏈球菌在綿羊血瓊脂平板上的臍窩狀菌落(如圖1所示)、伴放線凝集桿菌菌落特殊的內部結構(如圖2所示)、侵蝕艾肯菌的斗笠樣菌落、斯氏假單胞菌皺紋樣菌落、變形桿菌遷徙樣菌落、銅綠假單胞菌的水溶性色素、紫色色桿菌的'脂溶性色素(如圖3所示)、粘質沙雷菌的紅色色素(如圖4所示)、產吲哚金黃桿菌產生的吲哚氣味、嗜血桿菌產生的鼠穴氣味、諾卡菌產生的腐土氣味、厭氧菌產生的腐氨氣味、熒光假單胞菌產生的黃色熒光素、某些厭氧菌可產生磚紅色熒光素等。有些細菌產生色素受到氣體的影響(粘質沙雷菌在厭氧環境下不產色)，有些細菌產生色素受到光線的影響(某些快速生長分枝桿菌是光產色或暗產色)。

對細菌菌落特徵的觀察和描述是細菌鑑定的第一步驟，其主要目的體現在以下幾方面。

1.1 病原菌定量或半定量　在對標本進行定量或半定量接種後，通過菌落計數可獲得定量或半定量結果，細菌的定量在尿液分析和療效動態觀察中具有臨牀意義，半定量適用於開放性標本的結果分析(確定優勢菌)。

1.2 確定病原菌　開放性標本受炎症組織周圍皮膚、黏膜的常居菌叢污染的可能性較大，觀察培養結果時應根據標本直接塗片鏡檢結果，結合菌落形態特徵來確定病原菌。

1.3 解釋血培養鏡檢結果　分析陽性血培養瓶的轉種結果時，應結合對陽性培養液直接塗片的鏡檢結果，如果塗片結果與培養結果不符，應考慮操作錯誤或是污染所致。

1.4 確定鑑定方向 根據不同培養基上的菌落形態特徵，結合革蘭染色鏡檢結果及快速輔助試驗(氧化酶、觸酶、凝固酶等)結果，可確定鑑定方向。

　　2 菌體形態觀察

革蘭染色細胞形態學是細菌分類學的基礎，臨牀微生物學實驗室仍然使用細胞形態學的方法進行細菌鑑定，掌握細胞形態學的標準方法能夠為準確鑑定細菌提供可靠保證。對細菌菌體形態特徵的觀察和描述是細菌鑑定的第二步驟，其主要目的體現在以下幾方面。

2.1 解釋培養結果、確定鑑定方向 無論是液體培養(如血培養、標本直接增菌培養)或是固體培養(接種瓊脂平板)，都應該將培養物進行塗片、染色鏡檢確定培養物的性質，即可快速報告，也是為下一步的鑑定指明方向。圖5所示為血培養陽性培養物塗片革蘭染色鏡檢結果。

2.2 鑑別細菌的手段 細菌菌體形態結合菌落形態特徵可對細菌進行鑑別。例如，在選擇性巧克力平板(加萬古黴素)上生長的草綠色溶血菌落，是乳桿菌還是腸球菌(VRE)只要塗片鏡檢就很容易區分;鮑曼不動杆與克雷白菌屬細菌的菌落形態相似，區別在於前者為革蘭陰性球杆菌(接近球菌)，後者為革蘭陰性桿菌;丹毒絲菌在血平板上的菌落形態與草綠色鏈球菌很相像，但鏡下形態差別很大。圖6所示為紅斑丹毒絲菌的革蘭染色鏡下形態。

2.3 鑑定方向及試劑選擇的依據 葡萄球菌和鏈球菌、革蘭陽性球菌和革蘭陽性桿菌、革蘭陰性球菌和革蘭陰性桿菌的鑑定方向均不同，鑑定試劑選擇也不同。

2.4 藥敏組合選擇的依據　CLSI文件規定，每一種細菌都有一定的抗菌藥物組合供選擇。要準確進行藥敏組合選擇，就必須有準確的細胞形態學結果作支持。

　　3 菌體特殊結構的觀察

3.1 莢膜 莢膜是某些細菌在細胞壁外包裹的一層粘液性物質，不同的細菌其莢膜成分也有一定差異，一般由多糖、多肽或蛋白質組成。莢膜作為細菌的毒力因子有必要對其染色觀察，但莢膜染色對於臨牀標本分離菌株的鑑定價值並不大。圖7所示為大腸埃希菌莢膜染色結果。

3.2 鞭毛 觀察細菌鞭毛對於細菌鑑定具有重要的價值。依據鞭毛位置和數量，細菌分為單端極鞭毛菌、單端雙鞭毛菌、單端叢鞭毛菌、周鞭毛菌、側鞭毛菌。鞭毛是細菌的動力器官，大多數情況下可用動力試驗驗證細菌鞭毛的存在，但動力試驗無法代替鞭毛染色在細菌鑑定中的地位。圖8所示為霍亂弧菌鞭毛染色結果。

3.3 芽胞 芽胞的形態包括芽胞形狀、芽胞位置和孢子囊膨大。芽胞形態分為圓柱形、橢圓形、球形，芽胞位置分為端生、近端生、中生或近中生。根據芽胞的形態學可以進行芽胞桿菌屬和梭菌屬的鑑定。芽胞染色並不優於革蘭染色，使用相差顯微鏡觀察芽胞優於芽胞染色和革蘭染色。圖9所示為艱難梭菌芽胞染色結果。

3.4 異染顆粒 其主要成分是多聚偏磷酸鹽，可隨菌齡的延長而變大。多聚磷酸鹽顆粒對某些染料有特殊反應，產生與所用染料不同的顏色，因而得名異染顆粒。如用甲苯胺藍、次甲基藍染色後不呈藍色而呈紫紅色。棒狀桿菌和某些芽胞桿菌常含有這種異染顆粒。白喉棒狀桿菌異染顆粒位於菌體兩端，故又稱極體，有助於該菌的鑑定。圖10所示為白喉棒狀桿菌異染顆粒染色結果。

綜上所述, 臨牀微生物學實驗室常規鑑定細菌離不開形態學檢查,很難想象革蘭染色和形態學檢查錯誤會得到正確的鑑定結果，形態學檢查對鑑定細菌起着“導航”作用，具有重要的價值，臨牀微生物學檢驗工作者應予重視。