檢驗技師考點:軟瓊脂培養法克隆
(1)軟瓊脂的配製:含有20%NCS(小牛血清)的.2倍濃縮的RPMI1640.
①1%瓊脂水溶液:高壓滅菌,42℃預熱。
②0.5%瓊脂:由1份1%瓊脂加1份含20%小牛血清的2倍濃縮的RPMI1640配製而成。置42℃保温。
(2)用上述0.5%瓊脂液(含有飼養細胞)15ml傾注於直徑為9cm的平皿中,在室温中待凝固後作為基底層備用。
(3)按100/ml,500/ml或5000/ml等濃度配製需克隆的細胞懸液。
(4)1ml 0.5%瓊脂液(42℃預熱)在室温中分別與1ml不同濃度的細胞懸液相混合。
(5)混勻後立傾注於瓊脂基底層上,在室温中10min,使其凝固,孵育於37℃、5%CO2孵箱中。
(6)4~5天 後即可見針尖大小白色克隆,7~10天后,直接移種至含飼養細胞的24孔中進行培養。
(7)檢測抗體,擴大培養,必要是地再克隆化。
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