公衞執業醫師考點:多肽鏈的分離
細胞核中DNA的某一區段轉錄出來的mRNA從核孔穿出來進入細胞質中,與核糖體結合起來。蛋白質合成就在核糖體進行。蛋白質開始合成時,首先核糖體與mRNA結合在一起,核糖體附着在mRNA的一端(起動部位),然後沿着mRNA從5′3′方向移動(當核糖體向前移動不久,另一個核糖體又結合上去,所以一個mRNA可以有多個核糖體連續上去)。
在測定一個蛋白質的結構以前,首先必須保證被測蛋白質的純度,使結果準確可靠。其次要了解它的分子量和亞基數,按照其亞基數將蛋白質分成幾個多肽鏈。
蛋白質分子多肽鏈的連接有共價結合和非共價結合兩種。要拆開以共價結合的-S-S-連接的多肽鏈,必須採用的化學處理方法常有:
①過甲酸氧化
用氧化劑過甲酸斷裂-S-S-.這個反應一般在0℃下進行2小時左右,兩個S就全部能轉變成磺酸基,這樣被氧化的半胱氨酸稱為磺基丙氨酸。
如果蛋白質分子中同時存在半胱胺酸,那麼也會被氧化成磺基丙氨酸。此外甲硫氨酸和色氨酸也可被氧化,從而增加分析的複雜性。
②巰基乙醇還原
利用還原劑巰基乙醇亦可使蛋白質的-S-S-斷裂。當高濃度的巰基乙醇在pH8?條件下室温保温幾小時後,可以使-S-S-定量還原為桽H.與此同時反應系統中還需要有8摩爾脲或6摩爾鹽酸胍使蛋白質變性,多肽鏈鬆散成為無規則的'構型,此時還原劑就可作用於-S-S-.此反應是可逆的,因此要使反應完全,疏基乙醇的濃度必需在0.1-0.5摩爾。
③Cleland試劑的還原作用
Cleland′s指出二硫赤蘇糖醇(dithioerythriotol)及二硫蘇糖醇(dithiothriotol)在氧化還原能力上是比較強的試劑,只要0.01摩爾就能使蛋白質的-S-S-還原,反應基本與疏基乙醇相似,且在許多球蛋白反應中,可以不用變性劑。
Cleland試劑首先與蛋白質-S-S-形成中間物,反應終了,還原劑被氧化形成一個穩定的六環化合物,蛋白質則被還原。
還原蛋白不穩定,SH基極易氧化重新生成-S-S-鍵。穩定SH基的方法有:
(A)烷基化試劑使SH基轉變為穩定的硫醚衍生物。
如果碘代乙酰胺代替碘代乙酸,其產物S?羧氨甲基衍生物不帶電荷,磺代乙酸也可與組氨酸、蛋氨酸和賴氨酸發生反應,但反應條件不同,可通過各種pH及反應時間進行控制。
(B)氨乙基化
蛋白質分子的幾條肽鏈若以非共價健結合,則用尿素、鹽酸胍等變性劑即可拆開。蛋白質的多肽鏈被拆開後,將它分離純化,一般多用凝膠過濾、離子交換、電泳等方法,茲不贅述。
分離純化後的每條肽鏈還要進一步分析其末端。
-
2017年公衞執業醫師《醫學免疫》第一、二章知識點總結
2017年公衞執業醫師考試的報名時間還沒有公佈。為了方便考生更好的複習公衞執業醫師考試醫學免疫科目的知識。下面是yjbys小編為大家帶來的一些免疫第一二章知識彙總,歡迎閲讀。基本概念及要點:1.免疫:是指機體識別和排除抗原性異物的功能,從而維持機體的生理平衡...
-
2017年公衞執業醫師考試精選考試題及答案
精選考試題一:一、A1型題1.下列哪項是膀胱鏡檢查的禁忌症A前列腺增生症B膀胱腫瘤並出血C膀胱陰道瘻D急性前列腺炎E前列腺結石2.奔跑、打噴嚏時有尿液不自主流出,考慮為A充溢性尿失禁B神經性尿失禁C急迫性尿失禁D壓力性尿失禁E真性尿失禁3.下列哪種疾病一般不引起...
-
2017公衞執業醫師考試模擬題(附答案)
公衞執業醫師考試模擬題1、《中華人民共和國傳染病防治法》規定報告管理的傳染病分為BA、甲類、乙類B、甲類、乙類、丙類C、乙類、丙類D、甲類、乙類、丙類、丁類2、目前《中華人民共和國傳染病防治法》規定的法定管理傳染病共有種DA、35B、37C、36D、393、200...
-
艾滋病的四個早期症狀表現與預防方法
艾滋病是屬於性病的一種,其危害性不用我説,大家都知道。艾滋病有四個階段,急性感染期、潛伏期、艾滋病前期和典型艾滋病期。而且艾滋病每個時期的症狀是不一樣的,而且不是所有感染艾滋病的患者都會經歷這四個階段。下面是yjbys小編為大家帶來的艾滋病的四個早期症...